Preimplantačné genetické testovanie embryí (PGT)

Preimplantačné genetické testovanie embryí (PGT) je pokročilá metóda viazaná na techniky umelého oplodnenia, ktorá umožňuje geneticky vyšetriť embryá ešte pred ich prenosom do maternice, teda embryotransferom. Cieľom je vybrať embryo s najvyššou šancou na zdravý vývoj a znížiť riziko potratu či prenosu dedičného ochorenia do ďalších generácií.

Preimplantačné genetické testovanie (PGT)

Preimplantačné genetické testovanie embryí je modernou metódou spájajúcou asistovanú reprodukciu s klinickou genetikou, ktorá umožňuje odhaliť genetické odchýlky u embryí v ranom štádiu vývoja a pomáha tak znížiť riziko neúspešného embryotransferu, potratu alebo narodenia dieťaťa so závažným genetickým ochorením.

Posunúť nadol
Preimplantačné genetické testovanie embryí

Princíp IVF liečby s preimplantačným genetickým testovaním embryí

Preimplantačné genetické testovanie embryí

Kultivácia a príprava embrya na biopsiu

Po oplodnení vajíčok sú vzniknuté embryá kultivované v prísne kontrolovaných laboratórnych podmienkach do 5. – 6. dňa, keď sa v optimálnom prípade embryá vyvinú do štádia tzv. hatchujúcej, teda liahnucej sa blastocysty, ktorá predstavuje ideálnu fázu na bezpečný odber buniek, teda biopsiu, určených na preimplantačné genetické testovanie.

Posunúť nadol

Asistovaný hatching ako súčasť kultivácie

Za účelom dosiahnutia čo najvyššieho počtu embryí v tomto štádiu vykonávame 3. deň kultivácie pri všetkých embryách asistovaný hatching. Tento cielený zásah laserom podporuje prirodzené uvoľnenie embrya z ochranného obalu (zona pellucida) a vytvára vhodné podmienky na šetrnú a bezpečnú biopsiu.

Posunúť nadol
Preimplantačné genetické testovanie embryí
Preimplantačné genetické testovanie embryí

Šetrný odber buniek pre genetickú analýzu

Biopsia je laboratórny výkon, pri ktorom je pomocou mikropipety a laseru šetrne odobraných z blastocysty 5 až 10 buniek trofektodermu, teda základu placenty a embryonálnych obalov, nie samotného zárodku, tzv. embryoblastu. Zákrok teda ďalší vývoj embrya nijako negatívne neovplyvňuje. Získaný materiál je prenesený do mikroskúmavky a v genetickom laboratóriu podrobený dôkladnej genetickej analýze podľa zvoleného typu genetického vyšetrenia:

Posunúť nadol

Po biopsii sú embryá zmrazené veľmi šetrnou metódou vitrifikácie

Genetické vyšetrenie embryí trvá 3 až 5 týždňov v závislosti od typu genetického vyšetrenia. Po jeho dokončení je na kryoembryotransfer (KET) vybrané embryo, pri ktorom neboli detegované genetické abnormality sledované zvolenou metódou.

Kroky genetickej analýzy

1. Príprava DNA z odobratých buniek

Z malého množstva buniek, cca 5 – 10, je laboratórne pripravený dostatok DNA na analýzu celého genómu embrya, teda jeho všetkej genetickej informácie. Tento krok sa nazýva celogenómová amplifikácia a umožňuje vykonať podrobné vyšetrenie aj z veľmi malej vzorky embrya.

2. Komplexná a cielená genetická analýza embryí

Pre genetické vyšetrenie embryí sa využívajú rôzne molekulárno-genetické metódy v závislosti od typu a cieľa vyšetrenia. K ich správnemu nastaveniu je potrebné mať k dispozícii karyotypy (vyšetrenie počtu a štruktúry chromozómov) rodičov, prípadne genetickú správu opisujúcu sledovanú monogénnu mutáciu (genetickú odchýlku v jednom konkrétnom géne).

Molekulárno-genetické metódy používané na vyšetrenie embryí

NGS (sekvenovanie novej generácie)

Slúži na celkové zhodnotenie genetického stavu embrya. Umožňuje vyšetriť počet chromozómov a odhaliť aj štruktúrne abnormality chromozómov, ktoré môžu ovplyvniť ďalší vývoj embrya.

Karyomapping

Nepriama metóda využívaná najmä pri monogénnych ochoreniach v rámci PGT-M. Pomocou porovnania s referenčnými vzorkami DNA rodičov a ďalších rodinných príslušníkov umožňuje zistiť, či embryo zdedilo sledovanú genetickú chorobu, a zároveň zahŕňa aj kontrolu počtu chromozómov, ako pri PGT-A.

Priama detekcia mutácie

Cielené vyšetrenie, pri ktorom sa analyzuje konkrétna varianta mutácie v sledovanom géne. Najčastejšie sa využívajú metódy PCR a sekvenovania, napríklad Sangerovo sekvenovanie, ktoré presne určí prítomnosť či neprítomnosť danej mutácie v embryu. Priama detekcia mutácie sa využíva predovšetkým v prípadoch, keď nie je možné získať referenčné vzorky DNA príbuzných potrebné pre nepriame metódy, ktoré sú z hľadiska diagnostiky spoľahlivejšie.

3. Výber geneticky zdravého embrya

Na základe výsledkov laboratórium odporučí, ktoré embryo má najvyššiu šancu na úspešné tehotenstvo a zdravý vývoj. Embryá sú medzitým bezpečne zmrazené a ich prenos prebehne až po vyhodnotení výsledkov.

Prečo je PGT užitočné

Zvyšuje šancu na úspešný transfer a tehotenstvo.

Znižuje riziko potratov spôsobených genetickými chybami.

Pomáha predísť prenosu dedičných chorôb.

Typy PGT podľa genetickej odchýlky

PGT-A

Preimplantačné genetické testovanie aneuploídií

PGT-A je genetické vyšetrenie, ktoré slúži na posúdenie správneho počtu chromozómov v bunkách embrya ešte pred jeho prenosom do maternice. Na jeho vykonanie stačia vyšetrené karyotypy rodičov.

Každá bunka v ľudskom tele okrem vajíčka a spermie obsahuje 46 chromozómov. Ak má embryo niektorý z chromozómov navyše alebo mu naopak niektorý chýba, tzv. aneuploidia, môže to viesť k neúspešnému uhniezdeniu embrya, opakovaným potratom alebo k vzniku geneticky podmienených ochorení, napríklad Downovho, Edwardsovho alebo Patauovho syndrómu.

PGT-A je určené najmä pre:

  • ženy vyššieho reprodukčného veku, nad 35 rokov,
  • páry s opakovanými neúspešnými embryotransfermi,
  • páry s opakovanými potratmi alebo narodením dieťaťa s vývojovou chybou,
  • mužov so závažnou poruchou spermiogramu, teratozoospermiou, po chemoterapii alebo po chirurgickom odbere spermií (TESE).

Hlavné výhody PGT-A

PGT-A umožňuje odhaliť početné chromozómové odchýlky ešte pred embryotransferom a vybrať embryo s najvyšším potenciálom na uhniezdenie a zdravý vývoj, čím výrazne znižuje riziko potratu a podporuje efektívnejšiu a cielenejšiu liečbu neplodnosti.

PGT-A PLUS

Rozšírené preimplantačné genetické testovanie aneuploídií

PGT-A PLUS je rozšírená forma preimplantačného genetického testovania aneuploídií, ktorá okrem stanovenia správneho počtu chromozómov u embrya poskytuje aj informácie o pôvode zistených odchýlok.

Čo PGT-A PLUS umožňuje navyše oproti štandardnému PGT-A:

  • určuje rodičovský pôvod chromozómových odchýlok, teda či genetická odchýlka pochádza z vajíčka alebo zo spermie,
  • pomáha rozlíšiť, či genetická chyba bola prítomná už v pohlavných bunkách, teda vo vajíčku alebo spermii, alebo k nej došlo až počas raného vývoja embrya.

Genetická analýza s použitím referenčnej vzorky DNA

Na rozdiel od štandardného PGT-A, ktoré je vyšetrované metódou NGS, teda sekvenovaním novej generácie, je PGT-A PLUS analyzované pomocou SNP-array technológie, teda analýzy jednonukleotidových polymorfizmov. Táto metóda umožňuje sledovať dedičné genetické znaky a určiť, či zistené chromozomálne odchýlky pochádzajú z vajíčka alebo zo spermie. Preto je na vyšetrenie potrebná referenčná vzorka DNA jedného z rodičov, ktorá slúži na presné objasnenie pôvodu genetickej zmeny.

Hlavná výhoda PGT-A PLUS

Metóda PGT-A PLUS poskytuje rozšírené genetické informácie najmä u párov s opakovanými neúspechmi liečby a podporuje individualizovaný prístup k liečbe neplodnosti. Umožňuje lepšie porozumieť pôvodu zistených genetických odchýlok a na základe týchto poznatkov cielene upraviť ďalší liečebný postup, napríklad zvážiť využitie darovaných vajíčok alebo spermií v nasledujúcom cykle.

PGT-SR

Preimplantačné genetické testovanie štruktúrnych aberácií

PGT-SR je genetické vyšetrenie embryí, ktoré sa zameriava na detekciu štruktúrnych odchýlok chromozómov, pri ktorých dochádza k zámene, presunu či strate častí chromozómov. Cieľom je vybrať embryo s kompletným a správne usporiadaným karyotypom, ktoré má najvyššiu šancu na úspešnú implantáciu, teda uhniezdenie, a zdravý vývoj.

PGT-SR je určené párom, u ktorých bola u jedného z partnerov zistená balancovaná, teda vyvážená, štruktúrna chromozomálna odchýlka, napríklad translokácia alebo inverzia, ktorá nemá vplyv na jeho zdravie, ale na jeho reprodukciu. Tieto odchýlky totiž vedú k tomu, že sa vo väčšej miere tvoria reprodukčné bunky (vajíčka/spermie) s nebalancovanou prestavbou, čo spôsobuje vznik embryí s nevyváženou genetickou informáciou, keď časť genetickej informácie chýba alebo je v nadbytku. Takéto embryá majú vyššie riziko spontánnych potratov alebo vrodených vývojových chýb.


Genetická analýza na základe karyotypu

PGT-SR využíva na detekciu štruktúrnych chromozómových prestavieb u embryí metódu NGS, teda sekvenovanie novej generácie. Pre genetickú analýzu je nevyhnutný karyotyp rodiča s presne identifikovanou abnormalitou, na ktorú je potom zamerané vyšetrenie embryí.

Hlavné výhody PGT-SR

PGT-SR umožňuje vybrať embryo bez štruktúrnych chromozomálnych abnormalít, znižuje riziko neúspešného tehotenstva a potratu a zároveň podporuje cielený a individualizovaný prístup k liečbe neplodnosti.

PGT-M

Preimplantačné genetické testovanie monogénnych chorôb

PGT-M je najpodrobnejšie genetické vyšetrenie embryí, ktoré slúži na odhalenie konkrétnych dedičných ochorení spôsobených zmenou, teda mutáciou, v jednom géne. Táto metóda umožňuje vybrať embryá, ktoré nenesú sledované genetické ochorenie, ešte pred ich prenosom do maternice.

PGT-M je určené pre páry:

  • u ktorých je známe genetické ochorenie v rodine, napríklad mutácie asociované s vysokým rizikom vzniku rakoviny – BRCA1, BRCA2, Huntingtonova choroba alebo myotonická dystrofia,
  • kde sú partneri prenášači dedičnej choroby, napríklad cystickej fibrózy, spinálnej muskulárnej atrofie alebo fenylketonúrie,
  • ktoré majú zvýšené riziko prenosu konkrétnej genetickej mutácie na svoje dieťa, napríklad riziko opakovania náhodne vzniknutej mutácie aj u ďalšieho potomka, napríklad neurofibromatózy.

Genetická analýza pomocou karyomappingu s referenčnými vzorkami DNA

Odobraté embryonálne bunky sú geneticky vyšetrené pomocou metódy karyomapping, ktorá umožňuje nepriamo a veľmi presne zistiť, či embryo nesie konkrétnu dedičnú mutáciu. Vyšetrenie je založené na porovnaní tzv. genetických markerov (SNP – jednonukleotidových polymorfizmov), teda znakov v okolí sledovaného génu s referenčnými vzorkami DNA rodičov a ďalšieho postihnutého/zdravého rodinného príslušníka.

Tieto referenčné vzorky slúžia na vytvorenie individuálnej genetickej „mapy" rodiny. Vďaka tomu možno spoľahlivo určiť, či embryo zdedilo zdravú, alebo mutovanú variantu génu, bez toho, aby bolo nutné analyzovať samotný gén tzv. priamou detekciou. Tento nepriamy prístup zároveň výrazne znižuje riziko tzv. alelického drop-outu (ADO), teda situácie, keď by pri genetickej analýze nebola zachytená jedna z rodičovských genetických variant, čo by mohlo viesť k falošne negatívnemu výsledku.

Alelický drop-out (ADO) vzniká v dôsledku analýzy veľmi malého množstva DNA získanej z obmedzeného počtu buniek embrya. Počas laboratórnej amplifikácie, teda namnoženia DNA, môže dôjsť k preferenčnému zosilneniu iba jednej genetickej varianty, teda genetickej informácie len jedného rodiča, zatiaľ čo genetická informácia pochádzajúca od druhého rodiča zostane nezachytená.

Metóda karyomapping tak poskytuje vysokú presnosť a spoľahlivosť genetického vyšetrenia. Jej ďalšou výhodou je, že súčasne hodnotí aj počet chromozómov v embryu, ako PGT-A, čo umožňuje vybrať embryá s najvyšším predpokladom pre zdravý vývoj a úspešné tehotenstvo.

Hlavné prínosy PGT-M

PGT-M poskytuje individuálne cielený prístup k liečbe neplodnosti, ktorý umožňuje vybrať a preniesť embryá bez sledovanej genetickej mutácie a zároveň pomáha zabrániť prenosu závažného dedičného ochorenia do ďalších generácií.

FAQ

Ovplyvní odber buniek vývoj embrya?

Nie. Odoberá sa iba niekoľko buniek z trofektodermu embrya, teda časti embrya, z ktorej sa neskôr vyvíja placenta, v štádiu tzv. hatchujúcej blastocysty.

Ako dlho trvá genetická analýza?

Spracovanie a vyšetrenie vzorky embryonálnej DNA v genetickom laboratóriu trvá v závislosti od zvoleného typu genetického vyšetrenia približne 3 až 5 týždňov.

Zvyšuje PGT-A šancu na tehotenstvo?

Áno. Výberom embrya so správnym počtom chromozómov sa zvyšuje šanca na úspešné uhniezdenie v maternici a znižuje sa riziko potratu.

Je PGT hradené poisťovňou?

Áno, u párov s lekárskou indikáciou, napríklad pri opakovaných potratoch, vyššom veku alebo nosičstve závažnej genetickej mutácie, je PGT hradené zo zdravotného poistenia. V ostatných prípadoch sa hradí podľa aktuálneho cenníka kliniky.

Dekoratívny prvok
Koordinátorky darcovstva
Telefón: +420 530 338 338 E-mail: info@reprogenesis.cz

Hlinky 144, 603 00 Brno, CZ

Potrebujete viac informácií?
Ozvite sa nám!

IVF koordinátorky
Telefon: +420 530 338 338 E-mail: info@reprogenesis.cz

Hlinky 144, 603 00 Brno, CZ

Potřebujete více informací?
Ozvěte se nám!