Preimplantační genetické testování embryí (PGT)

Preimplantační genetické testování embryí (PGT) je pokročilá metoda vázaná na techniky umělého oplodnění, která umožňuje geneticky vyšetřit embrya ještě před jejich přenosem do dělohy (embryotransferem). Cílem je vybrat embryo s nejvyšší šancí na zdravý vývoj a snížit riziko potratu či přenosu dědičného onemocnění do dalších generací.

Preimplantační genetické testování (PGT)

Preimplantační genetické testování embryí je moderní metodou spojující asistovanou reprodukci s klinickou genetikou, která umožňuje odhalit genetické odchylky u embryí v rané fázi vývoje a pomáhá tak snížit riziko neúspěšného embryotransferu, potratu nebo narození dítěte se závažným genetickým onemocněním.

Preimplantační vyšetření embryí

Princip IVF léčby s preimplantačním genetickým testováním embryí

Preimplantační vyšetření embryí

Kultivace a příprava embrya k biopsii

Po oplození vajíček jsou vzniklá embrya kultivována v přísně kontrolovaných laboratorních podmínkách do 5.–6. dne, kdy se v optimálním případě embrya vyvinou do stadia tzv. hatchující (klubající se) blastocysty, které představuje ideální fázi pro bezpečný odběr buněk (biopsii) určených k preimplantačnímu genetickému testování.

Asistovaný hatching jako součást kultivace

Za účelem dosažení co nejvyššího počtu embryí v tomto stadiu provádíme 3. den kultivace u všech embryí asistovaný hatching. Tento cílený zásah laserem podporuje přirozené uvolnění embrya z ochranného obalu (zona pellucida) a vytváří vhodné podmínky pro šetrnou a bezpečnou biopsii.

Preimplantační vyšetření embryí
Preimplantační vyšetření embryí

Šetrný odběr buněk pro genetickou analýzu

Biopsie je laboratorní výkon, kdy je pomocí mikropipety a laseru šetrně odebráno z blastocysty 5 až 10 buněk trofektodermu, tedy základu placenty a embryonálních obalů, nikoliv zárodku samotného (tzv. embryoblastu). Takže zákrok další vývoj embrya nijak negativně neovlivní. Získaný materiál je přenesen do mikrozkumavky a v genetické laboratoři podroben důkladné genetické analýze, dle zvoleného typu genetického vyšetření:

Po biopsii jsou embrya zmrazena velmi šetrnou metodou vitrifikace

Genetické vyšetření embryí trvá 3 až 5 týdnů (v závistosti na typu genetického vyšetření). Po jeho dokončení je pro kryoembryotransfer (KET) vybráno embryo, u něhož nebyly detekovány genetické abnormality sledované zvolenou metodou.

Kroky genetické analýzy

1. Příprava DNA z odebraných buněk

Z malého množství buněk (cca 5-10) je laboratorně připraven dostatek DNA pro analýzu celého genomu embrya (tedy jeho veškeré genetické informace). Tento krok se nazývá celogenomová amplifikace a umožňuje provést podrobné vyšetření i z velmi malého vzorku embrya.

2. Komplexní a cílená genetická analýza embryí

Pro genetické vyšetření embryí se využívají různé molekulárně genetické metody v závislosti na typu a cíli vyšetření. K jejich správnému nastavení je zapotřebí mít k dispozici karyotypy (vyšetření počtu a struktury chromozomů) rodičů, případně genetickou zprávu popisující sledovanou monogenní mutaci (genetickou odchylku v jednom daném genu).

Molekulárně genetické metody používané k vyšetření embryí

NGS (sekvenování nové generace)

Slouží k celkovému zhodnocení genetického stavu embrya. Umožňuje vyšetřit počet chromozomů a odhalit i strukturní abnormality chromozomů, které mohou ovlivnit další vývoj embrya.

Karyomapping

Nepřímá metoda využívaná zejména u monogenních onemocnění (v rámci PGT-M). Pomocí srovnání s referenčními vzorky DNA rodičů a dalších rodinných příslušníků umožňuje zjistit, zda embryo zdědilo sledovanou genetickou chorobu a zároveň zahrnuje i kontrolu počtu chromozomů (jako u PGT-A).

Přímá detekce mutace

Cílené vyšetření, při kterém se analyzuje konkrétní varianta mutace ve sledovaném genu. Nejčastěji se využívají metody PCR a sekvenování (např. Sangerovo sekvenování), které přesně určí přítomnost či nepřítomnost dané mutace v embryu. Přímá detekce mutace se využívá především v případech, kdy není možné získat referenční vzorky DNA příbuzných potřebné pro nepřímé metody (které jsou z hlediska diagnostiky spolehlivější).

3. Výběr geneticky zdravého embrya

Na základě výsledků laboratoř doporučí, které embryo má nejvyšší šanci na úspěšné těhotenství a zdravý vývoj. Embrya jsou mezitím bezpečně zmrazena a jejich přenos proběhne až po vyhodnocení výsledků.

Proč je PGT užitečné

Zvyšuje šanci na úspěšný transfer a těhotenství

Snižuje riziko potratů způsobených genetickými chybami

Pomáhá předejít přenosu dědičných nemocí.

Typy PGT v závislosti na tom, jakou genetickou odchylku potřebujeme identifikovat

PGT-A

Preimplantační genetické testování aneuploidií

PGT-A je genetické vyšetření, které slouží k posouzení správného počtu chromozomů v buňkách embrya ještě před jeho přenosem do dělohy. Pro jeho provedení stačí vyšetřené karyotypy rodičů.

Každá buňka v lidském těle (kromě vajíčka a spermie) obsahuje 46 chromozomů. Pokud má embryo některý z chromozomů navíc nebo mu naopak některý chybí (tzv. aneuploidie), může to vést k neúspěšnému uhnízdění embrya, opakovaným potratům nebo ke vzniku geneticky podmíněných onemocnění (např. Downův, Edwardsův nebo Patauův syndrom).

Pro koho je PGT-A určeno

  • ženy vyššího reprodukčního věku (nad 35 let)
  • páry s opakovanými neúspěšnými embryotransfery
  • páry s opakovanými potraty nebo po narození dítěte s vývojou vadou
  • muže se závažnou poruchou spermiogramu (teratozoospemie), po chemoterapii nebo po chirurgickém odběru spermií (TESE)

Hlavní výhody PGT-A

PGT-A umožňuje odhalit početní chromozomové odchylky ještě před embryotransferem a vybrat embryo s nejvyšším potenciálem k uhnízdění a zdravému vývoji, čímž výrazně snižuje riziko potratu a podporuje efektivnější a cílenější léčbu neplodnosti.

PGT-A PLUS

Rozšířené preimplantační genetické testování aneuploidií

PGT-A PLUS je rozšířená forma preimplantačního genetického testování aneuploidií, která kromě stanovení správného počtu chromozomů u embrya poskytuje také informace o původu zjištěných odchylek.

Co PGT-A PLUS umožňuje navíc oproti standardnímu PGT-A

  • určuje rodičovský původ chromozomových odchylek (zda genetická odchylka pochází z vajíčka nebo ze spermie)
  • pomáhá rozlišit jestli genetická chyba byla přítomna již v pohlavních buňkách (vajičku nebo spermii) nebo k ní došlo až během raného vývoje embrya

Genetická analýza s použitím referenčního vzorku DNA

Na rozdíl od standardního PGT-A, které je vyšetřováno metodou NGS (sekvenování nové generace), je PGT-A PLUS analyzováno pomocí SNP-array technologie (analýza jednonukleotidových polymorfismů). Tato metoda umožňuje sledovat dědičné genetické znaky a určit, zda zjištěné chromozomální odchylky pocházejí z vajíčka nebo ze spermie. Proto je k vyšetření (kromě karyotypů) nutný referenční vzorek DNA jednoho z rodičů, který slouží k přesnému objasnění původu genetické změny.

Hlavní výhoda PGT-A PLUS

Metoda PGT-A PLUS poskytuje rozšířené genetické informace zejména u párů s opakovanými neúspěchy léčby a podporuje individualizovaný přístup k léčbě neplodnosti. Umožňuje lépe porozumět původu zjištěných genetických odchylek a na základě těchto poznatků cíleně upravit další léčebný postup, například zvážit využití darovaných vajíček nebo spermií v následujícím cyklu.

PGT-SR

Preimplantační genetické testování strukturních aberací

PGT-SR je genetické vyšetření embryí, které se zaměřuje na detekci strukturních odchylek chromozomů, při kterých dochází k záměně, přesunu či ztrátě částí chromozomů. Cílem je vybrat embryo s kompletním a správně uspořádaným karyotypem, které má nejvyšší šanci na úspěšnou implantaci (uhnízdění) a zdravý vývoj.

PGT-SR je určeno párům, u kterých byla u jednoho z partnerů zjištěna balancovaná (vyvážená) strukturní chromozomální odchylka (např. translokace nebo inverze), která nemá vliv na jeho zdraví, ale na jeho reprodukci. Tyto odchylky totiž vedou k tomu, že se ve větší míře tvoří reprodukční buňky (vajíčka/spermie) s nebalancovanou přestavbou, což způsobuje vznik embryí s nevyváženou genetickou informací (část genetické informace chybí nebo je v nadbytku). Taková embrya mají vyšší riziko spontánních potratů nebo vrozených vývojových vad.


Genetická analýza na základě karyotypu

PGT-SR využívá k detekci strukturních chromozomových přestaveb u embryí metodu NGS (sekvenování nové generace). Pro genetickou analýzu je nezbytný karyotyp rodiče s přesně identifikovanou abnormalitou, na kterou je pak zacíleno vyšetření embryí.

Hlavní výhody

PGT-SR umožňuje vybrat embryo bez strukturních chromozomálních abnormalit, snižuje riziko neúspěšného těhotenství a potratu a zároveň podporuje cílený a individualizovaný přístup k léčbě neplodnosti.

PGT-M

Preimplantační genetické testování monogenních chorob

PGT-M je nejpodrobnější genetické vyšetření embryí, které slouží k odhalení konkrétních dědičných onemocnění, jež jsou způsobena změnou (mutací) v jednom genu. Tato metoda umožňuje vybrat embrya, která nenesou sledované genetické onemocnění, ještě před jejich přenosem do dělohy.

PGT-M je určeno pro páry:

  • u nichž je známo genetické onemocnění v rodině (např. mutace asociované s vysokým rizikem vzniku rakoviny – BRCA1, BRCA2; Huntingtonova choroba; myotonická dystrofie)
  • kde jsou partneři přenašeči dědičné choroby (např. cystická fibróza, spinální muskulární atrofie, fenylketonurie)
  • které mají zvýšené riziko přenosu konkrétní genetické mutace na své dítě (riziko opakování náhodně vzniklé mutace i u dalšího potomka– např. neurofibromatóza)

Genetická analýza pomocí karyomappingu s referenčními vzorky DNA

Odebrané embryonální buňky jsou geneticky vyšetřeny pomocí metody karyomapping, která umožňuje nepřímo a velmi přesně zjistit, zda embryo nese konkrétní dědičnou mutaci. Vyšetření je založeno na porovnání tzv. genetických markerů (SNP – jednonukleotidových polymorfismů) - znaků v okolí sledovaného genu s referenčními vzorky DNA rodičů a dalšího postiženého/zdravého rodinného příslušníka.

Tyto referenční vzorky slouží k vytvoření individuální genetické „mapy“ rodiny. Díky tomu lze spolehlivě určit, zda embryo zdědilo zdravou, nebo mutovanou variantu genu, aniž by bylo nutné analyzovat gen samotný tzv. přímou detekcí. Tento nepřímý přístup zároveň výrazně snižuje riziko tzv. alelického drop-outu (ADO), tedy situace, kdy by při genetické analýze nebyla zachycena jedna z rodičovských genetických variant, což by mohlo vést k falešně negativnímu výsledku.

Alelický drop-out (ADO) vzniká v důsledku analýzy velmi malého množství DNA získané z omezeného počtu buněk embrya. Během laboratorní amplifikace (namnožení DNA) může dojít k preferenčnímu zesílení pouze jedné genetické varianty (genetické informace jen jednoho rodiče), zatímco genetická informace pocházející od druhého rodiče zůstane nezachycena.

Metoda karyomapping tak poskytuje vysokou přesnost a spolehlivost genetického vyšetření. Její další výhodou je, že současně hodnotí i počet chromozomů v embryu (jako PGT-A), což umožňuje vybrat embrya s nejvyšším předpokladem pro zdravý vývoj a úspěšné těhotenství.

Hlavní přínosy

PGT-M poskytuje individuálně cílený přístup k léčbě neplodnosti, který umožňuje vybrat a přenést embrya bez sledované genetické mutace a zároveň pomáhá zabránit přenosu závažného dědičného onemocnění do dalších generací.

Nejčastější dotazy (FAQ)

Ovlivní odběr buněk vývoj embrya?

Ne. Odebírá se pouze několik buněk z trofektodermu embrya (části embrya, ze které se později vyvíjí placenta) ve stadiu tzv. hatchující blastocysty.

Jak dlouho trvá genetická analýza?

Zpracování a vyšetření vzorku embryonální DNA v genetické laboratoři trvá, v zavislosti na zvoleném typu genetického vyšetření, přibližně 3 až 5 týdnů.

Zvyšuje PGT-A šanci na těhotenství?

Ano. Vybráním embrya se správným počtem chromozomů se zvyšuje šance na úspěšné uhnízdění v děloze a snižuje se riziko potratu.

Je PGT hrazeno pojišťovnou?

Ano, u párů s lékařskou indikací (například při opakovaných potratech, vyšším věku nebo nosičství závažné genetické mutace) je PGT hrazeno ze zdravotního pojištění. V ostatních případech se hradí dle aktuálního ceníku kliniky.

Koordinátorky dárcovství
Telefon: +420 530 338 338 E-mail: info@reprogenesis.cz

Hlinky 144, 603 00 Brno, CZ

Potřebujete více informací?
Ozvěte se nám!

IVF koordinátorky
Telefon: +420 530 338 338 E-mail: info@reprogenesis.cz

Hlinky 144, 603 00 Brno, CZ

Potřebujete více informací?
Ozvěte se nám!